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小小小木馬d銅蟲 (小有名氣)
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[求助]
求助多肽超濾分離的經(jīng)驗(yàn)
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各位好,本人最近在做多肽的分離純化。分別用10K和3K的超濾離心管（5000 x g）對(duì)多肽酶解液進(jìn)行分離后發(fā)現(xiàn)10K以上和3K-10K的含量很高，而3K以下的很少。但是用液相測(cè)分子量分布顯示3K以下的應(yīng)占比90%以上，是離心管的問(wèn)題嗎，提高濃度的話膜上會(huì)出現(xiàn)沉淀。3K以下的由于濃度很低凍干后只能得到一點(diǎn)點(diǎn)樣品，而且會(huì)黏在容器上很難收集，只能用勺子刮下一團(tuán)很黏的東西，有沒(méi)有什么能夠濃縮的方法，旋蒸可以嗎。之后打算用超濾膜做，擔(dān)心會(huì)出現(xiàn)同樣的問(wèn)題。想問(wèn)問(wèn)我應(yīng)該如何收集3K以下的多肽。附上我凍干后3K以下的樣品，我是在塑料培養(yǎng)皿上用保鮮膜包住然后扎了幾個(gè)小孔后進(jìn)行凍干的。 3K以下.jpg |
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【答案】應(yīng)助回帖
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wolfghost: 博學(xué)EPI+1 2021-02-26 14:23:10
| 說(shuō)明不是酶解工藝的問(wèn)題，而是超濾過(guò)程中的問(wèn)題：1.超濾前確保溶液澄清，多離心幾次或過(guò)一次陶瓷膜，去除更多雜質(zhì)或大分子物質(zhì)；2.超濾時(shí)，進(jìn)行稀釋3倍左右過(guò)膜，減少在膜上面結(jié)垢，影響過(guò)膜質(zhì)量；3.確保膜的質(zhì)量，是否是好的；4.超濾時(shí)，注意超濾一定體積的溶液后，進(jìn)行膜清洗，具體怎么操作，要根據(jù)自己的樣品、膜的性能決定。希望以上經(jīng)驗(yàn)?zāi)軒偷侥悖? |
小小小木馬d
3樓2020-11-08 11:19:06
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