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郭高杰

新蟲 (正式寫手)


[交流] 蛋白表達(dá)

在用大腸Rosetta表達(dá),載體pet-28a,表達(dá)里氏木霉來源的swollenin蛋白,20度,0.1mM IPTG誘導(dǎo),收集菌體后,超聲破碎,跑蛋白膠,發(fā)現(xiàn)生成的是包涵體,請(qǐng)問接下來應(yīng)該怎么變性復(fù)性,得到有活性的蛋白?
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biosci

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★ ★
郭高杰(金幣+1): 謝謝參與
drwhoknowss: 金幣+1, 鼓勵(lì)交流 2019-01-15 06:42:22
先不要著急復(fù)性包涵體,建議換個(gè)載體試試,說不定就是可溶蛋白了

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2樓2019-01-14 21:15:56
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郭高杰

新蟲 (正式寫手)


引用回帖:
2樓: Originally posted by biosci at 2019-01-14 21:15:56
先不要著急復(fù)性包涵體,建議換個(gè)載體試試,說不定就是可溶蛋白了

大腸表達(dá)真核細(xì)胞來源的蛋白,很容易形成包涵體,想著接著往下做,有什么好方法嗎?

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4樓2019-01-14 21:21:46
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2011sp

鐵桿木蟲 (著名寫手)



郭高杰(金幣+1): 謝謝參與
你4度誘導(dǎo)試試

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15樓2019-01-15 08:45:13
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young1983

木蟲 (正式寫手)



郭高杰(金幣+1): 謝謝參與
送紅花一朵
芽孢桿菌分泌的真核來源的重組蛋白具有天然構(gòu)象和生物活性,避免形成包涵體;表達(dá)周期短,蛋白產(chǎn)率高,可以分泌到細(xì)胞外。

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17樓2019-01-15 10:13:19
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zhlq_mail

銅蟲 (小有名氣)



郭高杰(金幣+1): 謝謝參與
我一般16度表達(dá),同時(shí)也可以使用酵母系統(tǒng)試一下解決包涵體問題。
18樓2019-01-15 10:32:56
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匿名



郭高杰(金幣+1): 謝謝參與
本帖僅樓主可見
19樓2019-01-15 11:53:30
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郭高杰

新蟲 (正式寫手)


引用回帖:
19樓: Originally posted by 立林258369 at 2019-01-15 11:53:30
可以嘗試真核表達(dá),例如酵母表達(dá)

用畢赤酵母表達(dá),可是九月份表達(dá)出來過,在之后重復(fù)不出來了

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20樓2019-01-15 14:36:07
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假大空

木蟲之王 (文學(xué)泰斗)



郭高杰(金幣+1): 謝謝參與
好運(yùn)
27樓2019-01-20 09:36:01
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實(shí)驗(yàn)white

新蟲 (初入文壇)



郭高杰(金幣+1): 謝謝參與
你可以試著再改變下誘導(dǎo)溫度,如果還是沒有活性,那就只能復(fù)性了。

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28樓2019-01-21 00:00:22
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迭芳芳兒

銀蟲 (正式寫手)



郭高杰(金幣+1): 謝謝參與
29樓2019-03-09 10:56:14
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昔歸@&

新蟲 (正式寫手)


30樓2020-04-01 10:00:54
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tjw0824

木蟲 (著名寫手)



郭高杰(金幣+1): 謝謝參與
引用回帖:
4樓: Originally posted by 郭高杰 at 2019-01-14 21:21:46
大腸表達(dá)真核細(xì)胞來源的蛋白,很容易形成包涵體,想著接著往下做,有什么好方法嗎?
...

換載體,嘗試各種融合標(biāo)簽,包涵體復(fù)性不太好做,得率不高

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31樓2020-06-19 07:36:00
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簡單回復(fù)
2019-01-14 21:17   回復(fù)  
郭高杰(金幣+1): 謝謝參與
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nono20095樓
2019-01-14 21:37   回復(fù)  
郭高杰(金幣+1): 謝謝參與
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tzynew6樓
2019-01-14 22:27   回復(fù)  
郭高杰(金幣+1): 謝謝參與
Biotage7樓
2019-01-14 22:46   回復(fù)  
郭高杰(金幣+1): 謝謝參與
2019-01-14 22:49   回復(fù)  
郭高杰(金幣+1): 謝謝參與
2019-01-14 23:03   回復(fù)  
郭高杰(金幣+1): 謝謝參與
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2019-01-14 23:20   回復(fù)  
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guimu11樓
2019-01-14 23:34   回復(fù)  
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syhorchid12樓
2019-01-14 23:50   回復(fù)  
郭高杰(金幣+1): 謝謝參與
2019-01-15 01:16   回復(fù)  
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youngen14樓
2019-01-15 06:46   回復(fù)  
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gggggguo16樓
2019-01-15 08:47   回復(fù)  
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2019-01-15 15:43   回復(fù)  
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2019-01-15 16:03   回復(fù)  
郭高杰(金幣+1): 謝謝參與
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youngen23樓
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