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清若123456新蟲 (小有名氣)
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[求助]
求助大神們,PCR引物C端如何加蛋白標(biāo)簽flag?
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急急急,求大神們救救急(。。。。。。。。。。。。。。。。湊字?jǐn)?shù)。。。。。。。。。。。。。。。。。前面的帖子以及刪了,怎么這個還提示 對不起,您已經(jīng)發(fā)過類似內(nèi)容的主題了,請不要一帖多發(fā)哦發(fā)不了) 老師讓我在引物(PCR引物)序列中引入蛋白標(biāo)簽flag,方便后續(xù)的純化。我的蛋白是分泌蛋白,我查到分泌蛋白一般建議把標(biāo)簽插在C端,求問大神們,我這樣設(shè)計對不對? 上游引物F :CCC(保護(hù)堿基)+ AAGCTT (酶切位點(diǎn))+ KOZAK序列 +引物序列+GATTACAAGGATGACGACGATAAG(標(biāo)簽序列) 下游引物R:GC(保護(hù)堿基)+ GTCGAC(酶切位點(diǎn)) +引物序列 +CTTATCGTCGTCATCCTTGTAATC(flag標(biāo)簽序列反向互補(bǔ)) 我之前查的有人說說標(biāo)簽蛋白只需要加在上游引物就行,下游不用加?但那樣兩個的TM值不就差距很大了嗎? |
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新蟲 (小有名氣)
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剛錄用,沒有期刊號,但是在線可看的論文可以放為代表作嗎
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