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Sily2020新蟲 (小有名氣)
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求助帖:質(zhì)粒提取搖菌失敗求助 已有1人參與
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新手第一次做質(zhì)粒轉(zhuǎn)化,挑菌、提取,做的是PNL-4-3這個(gè)質(zhì)粒,轉(zhuǎn)化使用熱激法,質(zhì)粒+感受態(tài)細(xì)胞stbl3結(jié)合冰浴30min,熱激90s,在冰浴2min,加1ml的無抗LB培養(yǎng)基,搖1h,取10ml菌液鋪固體培養(yǎng)基,雖然長(zhǎng)菌挺密,但可挑出單菌落,然后10ml有抗培養(yǎng)基搖菌,搖了20管,過夜搖菌,渾濁了,然后用天根大抽提試劑盒,富集了將近200ml的菌體,嚴(yán)格按照說明書做,但最后提取出的質(zhì)粒濃度不到50ng/ul,純度OD260/280大于2,為什么呢?希望各位蟲友解答一下,感謝 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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